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一.Human IL-10  ELISA試劑盒檢測原理：

本(ben)(ben)試劑盒采用雙抗(kang)體夾心酶(mei)(mei)(mei)聯免疫吸(xi)附(fu)檢(jian)測技術(shu)。特(te)異性抗(kang)人(ren)IL-10單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體預包(bao)被在(zai)(zai)高親(qin)和力的(de)酶(mei)(mei)(mei)標板上。酶(mei)(mei)(mei)標板孔中(zhong)加(jia)入標準品和檢(jian)測樣本(ben)(ben)，經過(guo)孵育(yu)，樣本(ben)(ben)中(zhong)存(cun)在(zai)(zai)的(de)IL-10與(yu)固相抗(kang)體結(jie)合(he)。洗滌(di)去除(chu)(chu)未(wei)結(jie)合(he)的(de)物質后，加(jia)入生(sheng)物素化的(de)單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體，孵育(yu)。洗滌(di)去除(chu)(chu)未(wei)結(jie)合(he)的(de)生(sheng)物素抗(kang)體，加(jia)入辣(la)根過(guo)氧化物酶(mei)(mei)(mei)標記的(de)鏈霉親(qin)和素（S-HRP）。洗滌(di)，加(jia)入顯色底物TMB，避光顯色。終(zhong)止液終(zhong)止反應(ying)(ying)，在(zai)(zai)450 nm波長(chang)（參考波長(chang)570-630 nm）測定吸(xi)光度值。顏色反應(ying)(ying)的(de)深淺(qian)與(yu)樣本(ben)(ben)中(zhong)IL-1α的(de)濃(nong)度成(cheng)正比。

二.Human IL-10  ELISA試劑盒樣本采集與貯存
細胞培養上清 沉淀(dian)之后(hou)即(ji)刻檢(jian)測, 或者分裝，-20℃貯(zhu)存(cun)。避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。

血清樣本 分離(li)管分離(li)血清(qing)。在(zai)1000 g離(li)心之(zhi)前，使血樣凝集(ji)30分鐘。吸取血清(qing)樣本之(zhi)后即刻檢測，或者(zhe)分裝，-20℃貯(zhu)存。避免反復凍融(rong)。

血漿樣本 EDTA，枸櫞酸鈉或(huo)肝(gan)素抗凝(ning)收(shou)(shou)集血漿樣本。在血樣收(shou)(shou)集 30分鐘內離心收(shou)(shou)集樣本。即刻檢(jian)測，或(huo)者分裝，-20℃貯存。避免反復(fu)凍(dong)融。 本試劑盒可能適用于其它(ta)生物(wu)學樣本。

注意：檢(jian)測前，樣(yang)(yang)本中可見的(de)沉(chen)淀必須去除(chu)。不要使用嚴重溶(rong)血(xue)或高(gao)血(xue)脂的(de)樣(yang)(yang)本。 樣(yang)(yang)本應該被(bei)分(fen)裝并貯(zhu)存于-20℃，以避免人IL-6活性(xing)的(de)丟失。如果(guo)在(zai)(zai)(zai)24小(xiao)時內檢(jian)測，樣(yang)(yang)本可以存放(fang)在(zai)(zai)(zai)2-8℃。 避免樣(yang)(yang)本的(de)反復凍(dong)(dong)融。在(zai)(zai)(zai)分(fen)析(xi)前，冷凍(dong)(dong)樣(yang)(yang)本應該緩慢的(de)恢復至室(shi)溫(wen)，輕柔地混勻。

三.Human IL-10 ELISA試劑盒檢測步驟:

1. 準備好所有需要的試劑及工作濃度標準品。 2. 將不需要的板條拆卸下來，放回裝有干燥劑的鋁箔袋，重新封好封口。 3. 300 μl洗液洗板兩次，加入300 μl洗液靜置浸泡15分鐘。為了獲得理想的實驗結果浸泡是必須的。棄掉洗液之后，在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后，請立即使用微孔板，不要讓微孔板干燥。 4. 每孔加入50 μl檢測緩沖液。 5. 加入50 μl的標準品，樣本和對照品。保證連續加樣，請不要間斷。加樣過程在15分鐘內完成。 6. 每孔加入50 μl檢測抗體。 7. 使用封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育2小時。8. 棄掉液體，每孔加入300 μl洗液洗板，洗滌6次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能，必須*移除殘留液體。 9. 每孔加入100 μl辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。 10. 使用新的封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育45分鐘。 11. 重復步驟8。 12. 每孔加入100 μl顯色底物TMB，避光，室溫孵育10-30分鐘。 13. 每孔加入100 μl終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。 14. 在30分鐘之內，酶標儀450 nm波(bo)(bo)長(chang)(chang)測(ce)(ce)定(ding)OD值(zhi)(zhi)。如果能(neng)夠(gou)進行雙波(bo)(bo)長(chang)(chang)檢(jian)測(ce)(ce)，參考波(bo)(bo)長(chang)(chang)設定(ding)為570 nm或(huo)者630 nm。如果不能(neng)雙波(bo)(bo)長(chang)(chang)檢(jian)測(ce)(ce)，請用(yong)450 nm的測(ce)(ce)定(ding)值(zhi)(zhi)減(jian)去570 nm或(huo)630 nm的測(ce)(ce)定(ding)值(zhi)(zhi)。僅使用(yong)450 nm測(ce)(ce)定(ding)會導致OD值(zhi)(zhi)偏(pian)高(gao)，并且(qie)準確(que)度降低。