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一.Human IL-5 ELISA試劑盒檢測原理：

本(ben)(ben)試劑盒采用雙抗(kang)(kang)體夾心酶(mei)聯免疫吸附(fu)檢測技術(shu)。特異性抗(kang)(kang)人IL-5單克隆抗(kang)(kang)體預包被在(zai)高親和力的(de)(de)酶(mei)標(biao)(biao)板上。酶(mei)標(biao)(biao)板孔中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)標(biao)(biao)準品和檢測樣本(ben)(ben)，經過孵(fu)育，樣本(ben)(ben)中(zhong)存在(zai)的(de)(de)IL-5與固相抗(kang)(kang)體結合(he)。洗滌去除未(wei)結合(he)的(de)(de)物(wu)質后，加(jia)入(ru)(ru)生(sheng)物(wu)素化的(de)(de)單克隆抗(kang)(kang)體，孵(fu)育。洗滌去除未(wei)結合(he)的(de)(de)生(sheng)物(wu)素抗(kang)(kang)體，加(jia)入(ru)(ru)辣根(gen)過氧化物(wu)酶(mei)標(biao)(biao)記的(de)(de)鏈霉親和素（S-HRP）。洗滌，加(jia)入(ru)(ru)顯(xian)(xian)色(se)底(di)物(wu)TMB，避光顯(xian)(xian)色(se)。終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，在(zai)450 nm波長（參考波長570-630 nm）測定吸光度值(zhi)。顏色(se)反(fan)應(ying)的(de)(de)深淺與樣本(ben)(ben)中(zhong)IL-1α的(de)(de)濃(nong)度成正比。

二.Human IL-5 ELISA試劑盒樣本采集與貯存
細胞培養上清 沉淀之后即刻檢測, 或者(zhe)分(fen)裝(zhuang)，-20℃貯存。避免反復凍融。

血清樣本 分離管分離血(xue)清。在1000 g離心之前，使血(xue)樣凝集30分鐘。吸(xi)取血(xue)清樣本之后(hou)即刻(ke)檢測(ce)，或者(zhe)分裝(zhuang)，-20℃貯存。避免反復凍融。

血漿樣本 EDTA，枸櫞酸(suan)鈉或肝素抗(kang)凝(ning)收集血漿樣(yang)本。在(zai)血樣(yang)收集 30分鐘內離心(xin)收集樣(yang)本。即刻檢測(ce)，或者分裝，-20℃貯存。避免反(fan)復凍融。 本試劑盒可(ke)能適用(yong)于其它生物學樣(yang)本。

注意：檢(jian)測(ce)(ce)前(qian)，樣本(ben)中(zhong)可(ke)見的(de)沉淀必須(xu)去除。不要(yao)使用嚴重(zhong)溶(rong)血(xue)(xue)或高血(xue)(xue)脂的(de)樣本(ben)。 樣本(ben)應該(gai)被分裝并貯存(cun)于-20℃，以(yi)避免人IL-5活性的(de)丟失。如果在24小時內檢(jian)測(ce)(ce)，樣本(ben)可(ke)以(yi)存(cun)放在2-8℃。 避免樣本(ben)的(de)反(fan)復凍(dong)融。在分析前(qian)，冷凍(dong)樣本(ben)應該(gai)緩慢(man)的(de)恢(hui)復至(zhi)室溫，輕柔地混勻(yun)。

三.檢測步驟:

1. 準備好所有需要的試劑及工作濃度標準品。 2. 將不需要的板條拆卸下來，放回裝有干燥劑的鋁箔袋，重新封好封口。 3. 300 μl洗液洗板兩次，加入300 μl洗液靜置浸泡15分鐘。為了獲得理想的實驗結果浸泡是必須的。棄掉洗液之后，在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后，請立即使用微孔板，不要讓微孔板干燥。 4. 每孔加入50 μl檢測緩沖液。 5. 加入50 μl的標準品，樣本和對照品。保證連續加樣，請不要間斷。加樣過程在15分鐘內完成。 6. 每孔加入50 μl檢測抗體。 7. 使用封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育2小時。8. 棄掉液體，每孔加入300 μl洗液洗板，洗滌6次。每次洗板，在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能，必須*移除殘留液體。 9. 每孔加入100 μl辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。 10. 使用新的封板膜封板。100轉/分鐘振蕩，室溫孵育45分鐘。 11. 重復步驟8。 12. 每孔加入100 μl顯色底物TMB，避光，室溫孵育10-30分鐘。 13. 每孔加入100 μl終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。 14. 在30分鐘之內，酶標儀450 nm波長測(ce)(ce)定OD值(zhi)。如果能夠(gou)進行雙波長檢測(ce)(ce)，參考(kao)波長設定為570 nm或者630 nm。如果不能雙波長檢測(ce)(ce)，請用450 nm的測(ce)(ce)定值(zhi)減去570 nm或630 nm的測(ce)(ce)定值(zhi)。僅使用450 nm測(ce)(ce)定會導致OD值(zhi)偏(pian)高，并(bing)且準(zhun)確(que)度(du)降低。